高度致病的H5N1禽流感病毒于今年又再次袭击了中国和东亚其他地方。在中国,泰国和越南,该病毒被证明对人类是致命的。
禽流感病毒(AIV)直径约100纳米。禽流感病毒由8个长度介于900到2400个核糖核苷酸的单负链核糖核酸(RNA)组成。
鸟类是各种禽流感病毒的传播载体。2-5%的野生鸟类携带禽流感病毒。大多数禽流感病毒对鸟类并不致命也不会转移给人类。
我们根据禽流感病毒关键表面蛋白的亚型“血凝素” (HA or H)和“神经氨酸苷酶” (N)的英文名称第一个字母命名病毒。这两者都集中在病毒膜上。其中H5N1型禽流感病毒,已经在亚洲及土耳其造成数人死亡,但似乎并未发现其人传人的案例。
循环爆发的H5N1型禽流感病毒足够说明了发展一个高度灵敏,准确,快速的诊断测试的必要性。其重要性不仅体现在控制感染和早期抗病毒治疗方面,而且体现在对食品供应链上快速有效的产品控制方面。然而,细胞培养和随后的血凝素(HA or H)和神经氨酸苷酶(N)亚型血清测试需要1-2周的才能得到测试结果;因此,他们对货架寿命较短的食品在产品卫生状况方面的评估作用不大。另一方面,商业上通用的禽流感病毒抗原快速测试虽然既快速又简便,但亚型( H1和H5型)病毒存在交叉反应,难以做到亚型确诊。实时RT-PCR技术相较于其他检测方法的优势主要表现在检测速度快,能进行病毒载量的分析,具有更高的灵敏度和特异性。因此,应用实时RT-PCR技术的分子生物学检测方法是目前最有效及最快速的禽流感病毒检测方案。
德国莱茵TÜV中国集团深圳食品实验室直接针对H5N1型禽流感病毒成功开发了快速的,高灵敏度与特异性的,以荧光亮度检测为基础的,定量的RT-PCR检测方法。测试方法符合世界卫生组织制定的禽流感病毒检测标准,测试结果具备权威性。
检测方案:
由于RNA病毒经常发生快速变异,这使得对其检测必须集中于基因序列固定不变的区域。对广泛的禽流感病毒检测来说,首选的基因序列是基质蛋白(M)基因。而针对H5N1型禽流感病毒还应该测定H和N这两个特定的基因。因此,我们的测试步骤:首先是对样品进行基质蛋白初步扫描测试,确定是否存在禽流感病毒。若结果为阳性,则对血凝素5 ( H5型)和神经氨酸苷酶1 (N1型)进行特异确认检测。
实验仪器设备:
荧光定量PCR仪LightCycler 2.0 (罗氏诊断)
测试周期:
24小时
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